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小鼠notchELISA試劑盒標準

詳細介紹
品牌其他品牌貨號MM-0949M1
規格96T供貨周期現貨
主要用途科研實驗應用領域醫療衛生,化工,生物產業

小鼠notchELISA試劑盒標準

驗原理: 本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中豬白細胞介素 6(IL-6)水平。用純化的豬白細 胞介素 6(IL-6)捕獲抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被的微孔中依次加入豬白細胞 介素 6(IL-6),再與 HRP 標記的檢測抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過徹 底洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成的黃色。顏色的深淺和樣品中的豬白細胞介素 6(IL-6)呈正相關。用酶標儀在 450nm 波長 下測定吸光度(OD 值),通過標準曲線計算樣品中豬白細胞介素 6(IL-6)含量。 試劑盒組成請聯系公司技術小葉 樣本處理及要求: 1. 血清:室溫血液自然凝固 10-20 分鐘,離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉/分)。仔細收集 上清,保存過程中如出現沉淀,應再次離心。 2. 血漿:應根據標本的要求選擇 EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合 10-20 分鐘后,離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應該再次 離心。 3. 尿液:用無菌管收集,離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉/分)。仔細收集上清,保存過程 中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。 4. 細胞培養上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉 /分)。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時,用 PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞 濃度達到 100 萬/ml 左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心 20 分 鐘左右(2000-3000 轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。 5. 組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的 PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備 用。標本融化后仍然保持 2-8℃的溫度。加入一定量的 PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將 標本勻漿充分。離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢 測,其余冷凍備用。 6. 標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上 進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融. 7. 不能檢測含 NaN3 的樣品,因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。 操作步驟 1. 標準品的加樣:設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品 50μL;。 2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣 品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl,然后再加待測樣品 10μl (樣品稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃 動混勻。 3. 加酶:每孔加入酶標試劑 100μl,空白孔除外。 4. 溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 60 分鐘。 5. 配液:將 20 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 20 倍稀釋后備用。 6. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此 重復 5 次,拍干。 7. 顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯 色 15 分鐘. 8. 終止:每孔加終止液 50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。 9. 測定:以空白孔調零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應在加終止液 后 15 分鐘以內進行。 注意事項: 1. 試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未 用完,板條應裝入密封袋中保存。 2. 濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。 3. 各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間 控制在 5 分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。 4. 請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高,請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n 倍)后再測定,計 算時請乘以總稀釋倍數(×n×5)。 5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。 6. 底物請避光保存。 7. 嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準. 8. 所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。 9. 本試劑不同批號組分不得混用。 10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準。 計算: 以標準物的濃度為橫坐標,OD 值為縱坐標, 在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的 OD 值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋 倍數;或用標準物的濃度與 OD 值計算出標 準曲線的直線回歸方程式,將樣品的 OD 值 代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋 倍數,即為樣品的實際濃度。 試劑盒性能: 1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數 R 值為 0.95 以上。 2.批內變異系數與批間變異系數應分別小于 10%和 10% 。 檢測范圍: 25 pg/mL - 800 pg/mL 靈敏度: 檢測濃度小于 1.0 pg/mL 保存條件及有效期: 1.試劑盒保存: 2-8℃。

小鼠notchELISA試劑盒標準

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