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人膽囊癌細胞

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品牌其他品牌供貨周期一周
應用領域醫療衛生,環保,化工,生物產業,農業

人膽囊癌細胞傳代(dai)說明:

1.用(yong)75%酒精噴灑整個培(pei)(pei)養(yang)瓶(ping)消毒,將其平躺置(zhi)于培(pei)(pei)養(yang)箱(xiang)中(zhong)進(jin)行(xing)1-3小時的緩(huan)沖,.然后置(zhi)于無(wu)菌操作臺,打開瓶(ping)口,將其中(zhong)的培(pei)(pei)養(yang)液去掉,再往其中(zhong)加入(ru)5-6mL新鮮培(pei)(pei)養(yang)基(以T25培(pei)(pei)養(yang)瓶(ping)為例)并置(zhi)于細(xi)胞(bao)培(pei)(pei)養(yang)箱(xiang)中(zhong)培(pei)(pei)養(yang),根據細(xi)胞(bao)生長狀況及培(pei)(pei)養(yang)基顏色變化對其進(jin)行(xing)換液以及傳代(dai),一般2到3天換一次液;

2.待(dai)細胞長滿瓶底面積80%-90%,需要(yao)對(dui)其進行傳(chuan)(chuan)代,傳(chuan)(chuan)代比例為1:3到1:8;

3傳代步驟:將0.25%胰酶-0.53 mM EDTA消(xiao)(xiao)化(hua)液置(zhi)于(yu)37°預(yu)熱(re),倒掉培養瓶中(zhong)(zhong)的培養基(ji),往(wang)培養瓶中(zhong)(zhong)加(jia)(jia)入3-5 ml PBS,輕(qing)晃洗(xi)滌后棄(qi)去。往(wang)瓶中(zhong)(zhong)加(jia)(jia)1-2 ml預(yu)熱(re)好的胰酶,置(zhi)于(yu)37°孵育消(xiao)(xiao)化(hua)(次消(xiao)(xiao)化(hua)需(xu)時常取出置(zhi)于(yu)顯微(wei)鏡下觀察,以顯微(wei)鏡下細(xi)(xi)胞觸(chu)角(jiao)回(hui)收(shou)(shou)變圓(yuan)、輕(qing)拍瓶壁見細(xi)(xi)胞脫落為*消(xiao)(xiao)化(hua)時間,記錄*消(xiao)(xiao)化(hua)時間,以便(bian)于(yu)下次消(xiao)(xiao)化(hua)),消(xiao)(xiao)化(hua)好后加(jia)(jia)入3ml*培養基(ji)終止消(xiao)(xiao)化(hua)。用(yong)移液槍(qiang)輕(qing)輕(qing)吹(chui)打瓶壁上的細(xi)(xi)胞,使之*脫落,然(ran)后收(shou)(shou)集(ji)細(xi)(xi)胞懸液,1200rpm離(li)心(xin)3min,棄(qi)上清(qing),加(jia)(jia)入*培養基(ji)重懸細(xi)(xi)胞,進行傳代。

保存說明(ming):

凍(dong)存(cun)條件(jian):80%*培養(yang)基(ji)+10%FBS+10%DMSO

(備注:建議使用(yong)(yong)本(ben)公(gong)司的(de)冷凍液(H-W-100),用(yong)(yong)4度保(bao)存的(de)冷凍液直接重懸細胞,不能(neng)預熱后使用(yong)(yong)。)

保存(cun)(cun)條件:液氮(dan)存(cun)(cun)儲

人膽囊癌細胞常見(jian)問題說明:

1.培養瓶有破裂,培養液有漏液:細胞(bao)極大可能會(hui)污染,所以我(wo)們會(hui)及時安(an)排幫老師解決。

2.收到細胞后盡快(kuai)更換為(wei)含 10%血清(qing)的新鮮培養基(ji)(ji),如因特(te)殊情況需要(yao)繼(ji)續使(shi)用(yong)原瓶(ping)(ping)培養基(ji)(ji),請(qing)在原瓶(ping)(ping)培養基(ji)(ji)中額外添加 10%的血清(qing)(原瓶(ping)(ping)培養基(ji)(ji)的繼(ji)續使(shi)用(yong)時(shi)間zui長不宜超過 72 小時(shi))

3.細(xi)胞(bao)(bao)漂(piao)浮:培養(yang)(yang)瓶不開封,瓶口酒精擦拭后(hou)(hou)平(ping)躺放(fang)置在培養(yang)(yang)箱。1-2小時后(hou)(hou)觀察(cha),如(ru)細(xi)胞(bao)(bao)大部分又貼回瓶底,表明細(xi)胞(bao)(bao)活力正常,剩余漂(piao)浮的細(xi)胞(bao)(bao)可以(yi)去掉(diao),留(liu)8-10ml培養(yang)(yang)液(ye)培養(yang)(yang)觀察(cha),細(xi)胞(bao)(bao)生長至(zhi)匯合度80%,進行消(xiao)化傳代;如(ru)細(xi)胞(bao)(bao)還(huan)是不貼壁,將細(xi)胞(bao)(bao)離心收集轉(zhuan)到(dao)新培養(yang)(yang)瓶,原培養(yang)(yang)瓶加部分培養(yang)(yang)液(ye)繼續培養(yang)(yang),中間(jian)注意觀察(cha),我們的技術人(ren)員會(hui)一直(zhi)跟蹤(zong)指導,直(zhi)到(dao)問題解決。

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