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人膀胱癌細胞

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應用領域醫療衛生,環保,化工,生物產業,農業

人膀胱癌細胞使用方法:

,燒瓶培養的處理程序

在培養瓶中接種細胞并在培養基中*填充培養基以防止運輸過程中細胞的丟失。

1、收到后,目視檢查培養物是否有微生物污染的宏觀證據。

使用倒置顯微鏡(配備有相位傳感器),仔細檢查是否有微生物污染的證據。還檢查以確定大多數細胞是否仍然附著在燒瓶底部?在運輸過程中,培養物有時被粗略地處理,并且許多細胞經常分離并懸浮在培養基中(但仍然是可行的)。

2、如果細胞仍然附著,無菌去除5至10毫升的運輸介質。可以節省運輸媒介以重復使用。在5%℃的空氣中,在37℃下培養細胞,直到它們準備進行傳代培養BGC-823人胃腺癌細胞(低分化)沒有附著,無菌地移除燒瓶的全部內容物,并以1000rpm離心5至10分鐘。取出運輸介質并保存。在10毫升這種培養基中重新沉淀顆粒細胞并加入25厘米的燒瓶中。在空氣中5%℃下,在37℃下孵育,直至細胞準備進行傳代培養。

 

二、傳代程序

體積為75厘米的燒瓶。增加或減少其他尺寸培養容器所需的分離培養基的量。

1、去除和丟棄培養基。

2.用0.25%(w/v)胰蛋白酶0.53mM EDTA溶液沖洗細胞層,除去所有含有胰蛋白酶抑制劑的血清痕跡。

3.添加2.0~3.0 ml胰酶-EDTA溶液瓶中,倒置顯微鏡下觀察細胞到細胞層分散(取決于胰蛋白酶的批)。

注意:為了避免結塊,不要在擊打或搖晃瓶子時攪拌細胞,等待細胞分離。難以分離的細胞可以放置在37°C以促進擴散。

4、加入6~8毫升的完整生長培養基,輕輕吸液,抽吸細胞。

5、在新培養容器中加入適當的細胞懸液等分試樣。

6、培養37°C培養基。

推薦栽培比為1:3∶1:4。

介質更新:每周2至3次

 

三、人膀胱癌細胞冷凍保存程序

該協議使用量在75平方厘米的瓶;比例減少或增加的其他尺寸的分離介質的培養容器的數量。

1、去除和丟棄培養基。

2。簡要沖洗細胞層0.25(w/v)trypsin0.53mm EDTA溶液去除所有痕跡血清含有胰蛋白酶抑制劑。

3。加入2至3毫升的胰蛋白酶-EDTA溶液瓶中,倒置顯微鏡下觀察細胞到細胞層是分散的(通常在1到10分鐘)。

注意:為了避免結塊,不要在擊打或搖晃瓶子時攪拌細胞,等待細胞分離。難以分離的細胞可以放置在37°C以促進擴散。

4、加入6~8毫升的完整生長培養基,輕輕吸液,抽吸細胞。

5。去除胰酶EDTA溶液,將細胞懸液到離心管和旋轉約5 1000rpmfor 10分鐘。

6、低溫保存培養液中的上清液和復蘇細胞。

7、將細胞轉移至低溫瓶,1ml/瓶。

8、低溫容器中的細胞Frozen(NalgENα5100-01)。

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