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人組織細胞淋巴瘤細胞

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應用領域醫療衛生,環保,化工,生物產業,農業

人組織細胞淋巴瘤細胞培養步驟

一.培養基及培養凍存條件準備:

1) 準備基礎培養基( GIBCO,,添加NaHCO3 1.5g/L,丙酮酸鈉 0.11g/L);優質胎牛血清,10%。

2) 培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液:90%*培養基,10%DMSO,現用現配。液氮儲存。

二. 細胞處理:

1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養基,培養過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。

2) U937人組織細胞淋巴瘤細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。

對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:

1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于37℃培養箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。

3. 按6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。

4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

3)細胞凍存:待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,棄去培養基后加入少量胰酶,細胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進行凍存。

人組織細胞淋巴瘤細胞注意事項:

1.收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好,培養液是否有漏液、渾濁等現象,若有上述現象發生請及時和我們聯系。

2.先不開瓶蓋,瓶身擦拭酒精后放在培養箱靜置數小時(4h左右),穩定細胞狀態,切忌在溫箱內靜置過夜。

3.靜置后鏡檢,拍照,記錄細胞狀態。建議傳代后也拍照記錄細胞生長情況。

4.  懸浮細胞:將細胞瓶內液體都轉移至無菌離心管內,1000 轉/分鐘離心5min,培養基上清可備用,管底細胞沉淀用培養基重懸。鏡檢時若細胞密度超過80%,可將細胞懸液分至2個細胞瓶內培養;若密度未超過80%,細胞懸液移至原瓶繼續培養,待達到80%時再正常傳代。備注:聚團生長慢,有密度依賴,必須使用T25培養瓶豎立培養,3天一次半量換液一次,1-2周傳代一次

貼壁細胞:若細胞密度超過80%,可正常傳代;若未超過80%,收集細胞瓶內的培養基,留8ml繼續培養至80%左右再傳代,瓶蓋可稍微擰松。備注:細胞貼壁慢,傳代后細胞放2天不動

5.細胞瓶內的培養基含血清和雙抗,可收集后4℃保存備用,可補加2%血清。剛開始傳代時建議一半用細胞瓶內的培養基,一半用客戶自備的培養基,使細胞逐漸適應培養條件,以免因不適應而造成生長狀態不佳。

6.因為人組織細胞淋巴瘤細胞培養過程外因太多,所以我們的售后保障期為一周,超過一周的細胞我們會酌情處理,但不提供免費更換服務。ZYC3695    小鼠海馬趾神經元    MN-h    形態:貼壁,懸浮均有;上皮細胞樣    培養條件:MEM/F12 +10% FBS 

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