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人卵巢顆粒細胞癌

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應用領域醫療衛生,環保,化工,生物產業,農業

人卵巢顆粒細胞癌傳代(dai)說明:

1.用75%酒精噴灑整個培(pei)養瓶(ping)消毒,將其(qi)平躺置于(yu)(yu)培(pei)養箱(xiang)中(zhong)進行(xing)1-3小時的(de)緩(huan)沖,.然(ran)后置于(yu)(yu)無菌操作臺(tai),打開瓶(ping)口,將其(qi)中(zhong)的(de)培(pei)養液(ye)(ye)去掉,再往其(qi)中(zhong)加入5-6mL新(xin)鮮(xian)培(pei)養基(ji)(以T25培(pei)養瓶(ping)為例)并置于(yu)(yu)細胞培(pei)養箱(xiang)中(zhong)培(pei)養,根據細胞生長狀況及(ji)培(pei)養基(ji)顏色(se)變化對其(qi)進行(xing)換液(ye)(ye)以及(ji)傳代(dai),一般2到3天換一次液(ye)(ye);

2.待細(xi)胞長滿瓶底面(mian)積80%-90%,需要對其進行(xing)傳(chuan)代(dai),傳(chuan)代(dai)比例為(wei)1:3到1:8;

3傳代(dai)步驟:將0.25%胰(yi)酶-0.53 mM EDTA消(xiao)化(hua)液置(zhi)(zhi)于(yu)37°預熱,倒掉培養瓶(ping)(ping)中(zhong)的培養基,往培養瓶(ping)(ping)中(zhong)加(jia)(jia)入(ru)3-5 ml PBS,輕(qing)晃(huang)洗滌后棄(qi)去。往瓶(ping)(ping)中(zhong)加(jia)(jia)1-2 ml預熱好的胰(yi)酶,置(zhi)(zhi)于(yu)37°孵育消(xiao)化(hua)(次(ci)消(xiao)化(hua)需時(shi)(shi)常取出(chu)置(zhi)(zhi)于(yu)顯(xian)微(wei)鏡(jing)下觀察(cha),以顯(xian)微(wei)鏡(jing)下細胞觸角(jiao)回收變圓、輕(qing)拍瓶(ping)(ping)壁(bi)見細胞脫落為*消(xiao)化(hua)時(shi)(shi)間,記(ji)錄*消(xiao)化(hua)時(shi)(shi)間,以便于(yu)下次(ci)消(xiao)化(hua)),消(xiao)化(hua)好后加(jia)(jia)入(ru)3ml*培養基終(zhong)止消(xiao)化(hua)。用(yong)移液槍輕(qing)輕(qing)吹(chui)打(da)瓶(ping)(ping)壁(bi)上的細胞,使之*脫落,然后收集細胞懸(xuan)(xuan)液,1200rpm離(li)心3min,棄(qi)上清,加(jia)(jia)入(ru)*培養基重懸(xuan)(xuan)細胞,進行(xing)傳代(dai)。

保(bao)存說(shuo)明(ming):

凍存條件:80%*培養基+10%FBS+10%DMSO

(備注:建議使(shi)用本公司的冷(leng)凍(dong)液(H-W-100),用4度(du)保(bao)存的冷(leng)凍(dong)液直接重(zhong)懸細胞,不(bu)能預(yu)熱后使(shi)用。)

保存(cun)條件:液氮存(cun)儲

人卵巢顆粒細胞癌常見(jian)問題說明:

1.培養(yang)瓶(ping)有(you)破裂,培養(yang)液有(you)漏液:細(xi)胞極大可(ke)能會(hui)污染,所(suo)以我(wo)們會(hui)及時安排幫(bang)老師(shi)解決。

2.收到細胞后盡快更換為含 10%血清的新鮮培(pei)養(yang)基,如因特殊情況(kuang)需要(yao)繼續使(shi)(shi)用(yong)原瓶(ping)培(pei)養(yang)基,請在原瓶(ping)培(pei)養(yang)基中(zhong)額外添加 10%的血清(原瓶(ping)培(pei)養(yang)基的繼續使(shi)(shi)用(yong)時間zui長不宜超過 72 小時)

3.細(xi)(xi)(xi)胞漂(piao)浮:培(pei)(pei)養瓶不開封,瓶口(kou)酒(jiu)精擦拭后(hou)平躺放置在培(pei)(pei)養箱。1-2小時后(hou)觀察,如細(xi)(xi)(xi)胞大部(bu)分又貼(tie)(tie)回瓶底,表明(ming)細(xi)(xi)(xi)胞活(huo)力(li)正(zheng)常(chang),剩(sheng)余漂(piao)浮的(de)細(xi)(xi)(xi)胞可以去掉,留8-10ml培(pei)(pei)養液培(pei)(pei)養觀察,細(xi)(xi)(xi)胞生長至匯合度80%,進(jin)行消化(hua)傳(chuan)代;如細(xi)(xi)(xi)胞還(huan)是不貼(tie)(tie)壁(bi),將細(xi)(xi)(xi)胞離(li)心(xin)收集轉(zhuan)到(dao)新培(pei)(pei)養瓶,原培(pei)(pei)養瓶加部(bu)分培(pei)(pei)養液繼續培(pei)(pei)養,中間注意(yi)觀察,我們的(de)技術人員(yuan)會一直跟蹤指導,直到(dao)問題解決。

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