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人尤文氏肉瘤細胞

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人尤文氏肉瘤細胞分離培養法

分離培養法是支原體檢測的金標方法,其檢測精確度zui高。這種方法是從可疑的細胞培養體系中取樣,并接種到zui適宜支原體生長的瓊脂平板上。如果樣本中含有支原體,它們就會在這種瓊脂平板上*生長,zui終形成明顯可見的特征性菌落。分離培養法基本不會出現假陰性結果,因此被譽為支原體檢測金標準。不過分離培養法也存在兩個弊端,一是檢測時間太長,支原體要長出明顯克隆至少需要4周時間。二是盡管可以檢測絕大多數支原體種類,分離培養法也有力所不及的時候,例如支原體M. hyorhinis。

人尤文氏肉瘤細胞DNA檢測

DNA檢測需要將可疑樣品與指示細胞共同培養,因此一般需要幾天時間。DNA檢測所用的指示細胞通常是細胞質區域較大的Vero細胞,如果原樣本中含有支原體,那么當細胞DNA被熒光染料(如Hoechst染料)染色時,就可以在指示細胞的核周圍觀察到熒光斑點或熒光顆粒。分離培養法用來檢測支原體M. hyorhinis菌株并不可靠,而DNA法可以準確的將其檢測出來。

PCR法

PCR法也可以檢測M. hyorhinis菌株,PCR法檢測支原體只需幾個小時,是zui快但也是zui不靈敏的支原體檢測方法。該方法采用針對支原體DNA的引物用PCR檢測可疑樣本,其中PCR引物通常針對支原體的16S rRNA基因。在凝膠電泳過程中,支原體DNA會顯示為特異性條帶,以此指示支原體的存在。PCR法可以檢測大多數支原體,但謹慎起見同時使用另一種檢測方法來進行驗證。

酶學檢測和ELISA

此外,也還存在一些其他支原體檢測方法。例如酶學檢測是將可疑樣本添加到特定底物中,在這一體系內支原體的酶可以將ADP轉化為ATP,隨后能利用ATP發光的luciferase酶就可以指示支原體的存在。ELISA也能用于支原體檢測,以ELISA法為基礎的支原體檢測一般使用針對支原體16S rRNA基因的帶標記探針或抗體,來檢測培養物中是否含有支原體。

定期檢測

支原體感染會使培養細胞慢慢枯萎,因此對培養細胞定期進行支原體檢測非常重要。一般來說每1至3個月就應該進行一次支原體檢測。將定期支原體檢測常規化堅持下去,是細胞培養實驗室應對支原體感染的關鍵。

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