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人食管癌細胞

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詳細介紹
品牌其他品牌供貨周期一周
應用領域醫療衛生,環保,化工,生物產業,農業

人食管癌細胞細胞特性
1) 來源:食管癌
2) 形態:上皮細胞樣,貼壁生長
3) 含量:>1x106 個/mL
4) 污染:支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
5) 規格:T25瓶或者1mL凍存管包裝
 

人食管癌細胞運輸和保存

可選擇干冰運輸及發送復蘇存活細胞方式

(1)干冰運輸,收到后立即轉入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復蘇;

(2)存活細胞,收到后應繼續生長,傳代達到細胞生長狀態良好時,再進行凍存。具體操作見細胞培養步驟。

(3)收到細胞后請拍照,3天內如果發現污染,請及時拍照與我們聯系。
 
細胞用途:僅供科研使用。
                       
細胞接受后的處理:
1) 收到細胞后,請檢查是否漏液,如果漏液,請拍照片發給我們。
2) 請先在顯微鏡下確認細胞生長狀態,去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養約2-3h。
3) 棄去T25瓶中的培養基,添加6ml新的*培養基。
4) 如果細胞長滿(90%以上)請及時進行細胞傳代。
5) 接到細胞次日,請檢查細胞是否污染,若發現污染或疑似污染,請及時與我們取得聯系。
 
細胞培養步驟
一.培養基及培養凍存條件準備:

1) 準備RPMI-1640培養基;北美胎牛血清,10%;雙抗1%。
2) 培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配。

 

  • 二. 細胞處理:
    1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入250px皿中,加入約8ml培養基,培養過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
    2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
    對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
    1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
    2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于37℃培養箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
    3. 按6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。
    4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
    細胞凍存:待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。
    下面T25瓶為例;
    1.細胞凍存時,棄去培養基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶,細胞變圓脫落后,加入2ml*培養基終止消化,可使用血球計數板計數。
    2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數量分配到凍存管中,注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數目大于1X106個細胞凍存。
    3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

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