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人臍靜脈內皮細胞

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應用領域醫療衛生,環保,化工,生物產業,農業

人臍靜脈內皮細胞細胞復蘇

從液氮中取出細胞凍存管,迅速放入37℃水浴中解凍至管內殘留一點冰屑。用75%酒精擦拭凍存管后,將內容物吸至一15ml無菌離心管中,逐滴加入預溫至37℃的RPMI-1640培液4-5ml混勻,室溫1500rpm離心10分鐘棄上清。再用RPMI-1640培液4-5ml洗滌一次,離心后棄上清,加HUVEC*培養液4-5ml備用,每支HUVEC凍存管含細胞量為5×10個。

細胞接種和培養

1、細胞接種:

(1)、包被液:用去離水配制0.5%明膠溶液,過濾除菌。

(2)、培養瓶包被:取2-4個T25培養瓶,每個培養瓶加2-3ml0.5%明膠溶液,搖勻使包被液布滿培養瓶底面,置37℃2小時或放置過夜。

(3)、接種細胞:接種前吸凈包被液,按2500-5000個細胞/cm接種細胞(1支5×10個細胞可接種2-4個培養瓶),每瓶加培養液3-5ml,搖勻后置37℃5%CO2培養箱內培養24小時,此時細胞已*貼壁,更換培養液后繼續在37℃5%CO2培養箱內培養。

(4)、擴大培養:一般每周更換培養液2次,至細胞長至覆蓋培養面的70-80%可進行傳代或凍存。

消化細胞

消化液:用pH7.0-7.2的PBS或D-Hank'S液,分別配制0.25%胰酶液和0.02%EDTA-Na2液,用前按1:1混合。在細胞傳代或凍存前先消化細胞。具體操作如下:吸凈培養液,每瓶加消化液1ml,搖勻使其布滿培養瓶細胞面。37℃消化2-5分鐘。顯微鏡下看細胞回縮成圓形后,輕輕震動使絕大部細胞脫落后,每瓶加含10%FBS的RPMI-1640液的中和液4-5ml中和胰酶的消化作用,并用吸管輕輕吹打培養面使細胞*脫落后,吸至15ml無菌離心管內。4℃1500rpm離心10分鐘棄上清,再用中和液洗滌細胞,離心棄上清,加適量RPMI-1640液,混勻后取10ul 細胞懸液加10ul臺盼藍混勻后作細胞計數,按需要做步驟四或五。

細胞傳代

方法同步驟二。

人臍靜脈內皮細胞細胞凍存

調整細胞數2-5×10個/ml,按含細胞的RPMI-1640液ml數,配制等量的凍存液。凍存液中FBS占80%,DMSO占20%。例:含細胞的RPMI-1640液為8ml,應配凍存液8ml,其中FBS為6.4ml,DMSO為1.6ml,混勻。置細胞懸液于冰浴中,逐滴加入凍存液,邊加邊搖動。加完后用吸管吹打混勻。于冰浴中分裝細胞于凍存管中,1.8ml/管,再將凍存管置于凍存盒內置-80℃冰箱,24小時后轉入液氮中保存。

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