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小鼠小膠質細胞

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詳細介紹
品牌其他品牌供貨周期一周
應用領域醫療衛生,環保,化工,生物產業,農業

小鼠小膠質細胞   主要試劑:

(1) PBS:用購自中山公司的PBS粉劑,每袋加ddH2O定容至1000ml,調pH7.2,高壓滅菌消毒。

(2) 0.25%胰蛋白酶消化液:使用時濃度為0.25%,含0.02%EDTA,制備時即取250mg胰酶和20mgEDTA溶于100mLPBS溶液,并在無菌操作臺上用0.22um一次性過濾器過濾,50ml分裝,4℃保存。

(3) 接種液配制:用DMEM-F12 基礎培養90%,再加入10%胎牛血清,后按1%體積分數加入雙抗貯存液(青霉素+鏈霉素),使青霉素和鏈霉素的終濃度分別為100 U/mL和100 U/mL,置于4℃冰箱保存。

(4) 抗生素:青霉素(80萬U)和鏈霉素(100萬U)在無菌操作臺內以高壓滅菌過的雙蒸水溶解分別加入4ml滅菌水/青霉素,5ml滅菌水/鏈霉素),配制成20萬u/ml分裝,置于-20℃冰箱保存,臨用時4℃解凍,注意盡量避免反復凍融,并使培養基終濃度為100 u/ml。

(5)0.01% L-多聚賴氨酸溶液的配制:稱量 10mg L-多聚賴氨酸,溶于 100ml 滅菌去離子水,0.22μm 正壓濾器過濾分裝,-20℃保存。

(6)0.4%臺盼藍溶液的配制

臺盼藍 4 g

PBS 少許(研磨)

PBS 定容至 100ml,濾紙過濾,室溫保存。

(7)4%多聚甲醛的配制:

多聚甲醛 4 g

PBS 溶液 100ml

加熱至 60℃,邊滴加 1mol/L NaOH 邊攪拌,至液體澄清。

(8)四噻唑蘭溶液配制:

MTT 50mg

PBS 10ml

磁力攪拌 30min,滅菌 0.22µm 微孔濾膜過濾分裝,4℃保存,兩周有效。

實驗步驟:

1.培養板的包被

(1)將蓋玻片裁成 0.5cm×0.5cm 大小,浸洗、烘干。

(2)經 5%鹽酸浸泡30min,自來水沖洗20min,三蒸水沖洗,浸泡過夜并烘干;移入 95%酒精浸泡保存。用前酒精燈烤干,放入 24 孔細胞培養板。

(3)用 0.01%的 L-多聚賴氨酸溶液包被培養皿和小玻片,37℃恒溫孵育 4h 或常溫過夜。

去除 L-多聚賴氨酸溶液,滅菌去離子水漂洗培養孔及小玻片,晾干備用。

2.小鼠小膠質細胞的混合培養

(1) 75%(體積分數)酒精消毒新生 24h 內的清潔級小鼠,在無菌條件下斷頭,剪開頭皮及顱骨,取出腦組織,置于盛冷的pH7.2,無鈣、鎂的D-Hank's液的平皿中(下置冰袋)。小鼠小膠質細胞 

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