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小鼠小膠質細胞

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詳細介紹
品牌其他品牌供貨周期一周
應用領域醫療衛生,環保,化工,生物產業,農業

小鼠小膠質細胞   主要試劑:

(1) PBS:用購(gou)自中山公司的(de)PBS粉劑,每袋加ddH2O定容至(zhi)1000ml,調pH7.2,高壓(ya)滅菌消(xiao)毒(du)。

(2) 0.25%胰蛋白酶消化液:使(shi)用時濃度為0.25%,含(han)0.02%EDTA,制備時即取250mg胰酶和20mgEDTA溶(rong)于100mLPBS溶(rong)液,并在無菌操作臺上用0.22um一次性過濾器過濾,50ml分裝(zhuang),4℃保存。

(3) 接種(zhong)液配制:用(yong)DMEM-F12 基礎培養(yang)90%,再加(jia)(jia)入(ru)10%胎牛血(xue)清,后按1%體積(ji)分數加(jia)(jia)入(ru)雙抗貯存液(青(qing)霉(mei)(mei)(mei)素(su)+鏈霉(mei)(mei)(mei)素(su)),使青(qing)霉(mei)(mei)(mei)素(su)和鏈霉(mei)(mei)(mei)素(su)的終濃度分別為100 U/mL和100 U/mL,置于4℃冰箱保存。

(4) 抗生素:青霉素(80萬U)和(he)鏈霉素(100萬U)在無菌(jun)操作臺(tai)內(nei)以高壓滅菌(jun)過的雙蒸水(shui)溶解分別加入(ru)4ml滅菌(jun)水(shui)/青霉素,5ml滅菌(jun)水(shui)/鏈霉素),配(pei)制成20萬u/ml分裝,置于-20℃冰箱保存(cun),臨(lin)用時4℃解凍,注(zhu)意盡(jin)量避免反復凍融,并使培養(yang)基終濃度為100 u/ml。

(5)0.01% L-多(duo)聚賴氨(an)酸溶液的(de)配制:稱量 10mg L-多(duo)聚賴氨(an)酸,溶于 100ml 滅菌去離子水(shui),0.22μm 正壓濾(lv)器過濾(lv)分裝,-20℃保存。

(6)0.4%臺盼藍溶液(ye)的配制

臺盼藍 4 g

PBS 少許(xu)(研磨)

PBS 定(ding)容至(zhi) 100ml,濾(lv)紙過(guo)濾(lv),室溫(wen)保(bao)存。

(7)4%多聚(ju)甲醛的配制(zhi):

多聚甲醛 4 g

PBS 溶液(ye) 100ml

加(jia)(jia)熱(re)至 60℃,邊滴加(jia)(jia) 1mol/L NaOH 邊攪拌,至液(ye)體澄清。

(8)四噻唑蘭(lan)溶液配(pei)制(zhi):

MTT 50mg

PBS 10ml

磁力攪拌 30min,滅菌(jun) 0.22µm 微(wei)孔(kong)濾膜過濾分裝,4℃保(bao)存,兩(liang)周有效。

實驗步驟:

1.培養板的包被

(1)將(jiang)蓋(gai)玻片裁成 0.5cm×0.5cm 大小(xiao),浸洗、烘(hong)干。

(2)經 5%鹽酸浸(jin)泡(pao)30min,自來水沖(chong)洗(xi)(xi)20min,三蒸水沖(chong)洗(xi)(xi),浸(jin)泡(pao)過夜并烘干;移入 95%酒(jiu)精浸(jin)泡(pao)保存。用前酒(jiu)精燈烤(kao)干,放入 24 孔細胞培養板。

(3)用 0.01%的 L-多(duo)聚(ju)賴氨(an)酸溶(rong)液(ye)包(bao)被培養皿和小玻片,37℃恒溫孵育 4h 或常溫過夜。

去(qu)除 L-多聚賴氨酸溶液,滅菌去(qu)離子水漂洗培養孔及小玻片(pian),晾干備用。

2.小鼠小膠質細胞的混合培養

(1) 75%(體積分數)酒精消毒新生 24h 內的清潔級小鼠,在無菌條件下斷頭,剪開頭皮及顱骨,取出腦組織,置于盛冷的pH7.2,無鈣、鎂的D-Hank's液的平皿中(下置冰袋)。小鼠小膠質細胞 

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