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小鼠腦微血管內皮細胞

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小鼠腦微血管內皮細胞

1. 小鼠腦微血管內皮細胞液(ye)體培養基的保(bao)存是冷(leng)藏(zang)好(hao)?還(huan)是冷(leng)凍好(hao)?

  要冷(leng)(leng)(leng)藏!!因為液(ye)(ye)體培養(yang)基經冷(leng)(leng)(leng)凍后再經溶(rong)(rong)化時,其(qi)溶(rong)(rong)液(ye)(ye)的pH值會(hui)(hui)發生改變(bian),溶(rong)(rong)液(ye)(ye)往往變(bian)堿,某些成分溶(rong)(rong)解也會(hui)(hui)受到影(ying)響對細(xi)胞(bao)生長(chang)不利。故液(ye)(ye)體培養(yang)基一(yi)定要存放(fang)在冷(leng)(leng)(leng)藏箱中,通常液(ye)(ye)體培養(yang)基在冷(leng)(leng)(leng)藏條件下(xia)可存放(fang)6個月 ~ 一(yi)年。

  2.小鼠腦微血管內皮細胞 液體培養基中谷氨酰胺的作用,小鼠腦微血管內皮細胞及使用方法。

  幾(ji)乎所有的(de)(de)(de)細胞對(dui)谷(gu)氨(an)(an)酰(xian)胺(an)(an)(an)有較(jiao)高的(de)(de)(de)要(yao)求(qiu),細胞需(xu)要(yao)谷(gu)氨(an)(an)酰(xian)胺(an)(an)(an)合成蛋白質,在缺少谷(gu)氨(an)(an)酰(xian)胺(an)(an)(an)時,細胞生長不(bu)良(liang)而(er)死(si)亡。所以(yi)(yi),各種培(pei)(pei)(pei)養(yang)液中(zhong)都含有較(jiao)大量的(de)(de)(de)谷(gu)氨(an)(an)酰(xian)胺(an)(an)(an)。谷(gu)氨(an)(an)酰(xian)胺(an)(an)(an)在溶液中(zhong)很不(bu)穩定,應置(zhi)-20 ?C冰凍保存,用前加入培(pei)(pei)(pei)養(yang)基中(zhong)。加有谷(gu)氨(an)(an)酰(xian)胺(an)(an)(an)的(de)(de)(de)液體培(pei)(pei)(pei)養(yang)基4 ?C 冰箱儲存兩周以(yi)(yi)上時,應重(zhong)新(xin)加入原來量的(de)(de)(de)谷(gu)氨(an)(an)酰(xian)胺(an)(an)(an)。基礎醫學細胞中(zhong)心在其服務項(xiang)目中(zhong)配(pei)制分裝了高濃度(100倍)的(de)(de)(de)谷(gu)氨(an)(an)酰(xian)胺(an)(an)(an)溶液(1ml/支)。每支1ml的(de)(de)(de)谷(gu)氨(an)(an)酰(xian)胺(an)(an)(an)加到99ml*培(pei)(pei)(pei)養(yang)基中(zhong),其終濃度為2mM/ml培(pei)(pei)(pei)養(yang)基。包裝為粉紅色,-24?C保存。

  3. 小(xiao)鼠(shu)腦微血(xue)管內皮細胞 培養(yang)用液pH對細胞生(sheng)長(chang)的影響(xiang)

  由于,大多(duo)數細(xi)胞(bao)(bao)(bao)適宜pH為(wei)7.2~7.4,偏離(li)此范(fan)圍(wei)對(dui)細(xi)胞(bao)(bao)(bao)將產生有害的(de)影響。各(ge)種細(xi)胞(bao)(bao)(bao)對(dui)pH的(de)要求也不*相(xiang)同,原代培養細(xi)胞(bao)(bao)(bao)一般對(dui)pH變動(dong)耐受(shou)(shou)差,無限細(xi)胞(bao)(bao)(bao)系耐受(shou)(shou)力強。

  但總(zong)體(ti)(ti)(ti)來說(shuo),細胞(bao)耐(nai)酸性比耐(nai)堿性強一些,偏酸環境中更利(li)于細胞(bao)生長。因此,我(wo)們在(zai)配制培(pei)養用液時,可把液體(ti)(ti)(ti)的pH稍微(wei)調得偏酸一些。液體(ti)(ti)(ti)在(zai)經過(guo)(guo)0.10um或0.22um濾膜過(guo)(guo)濾時,溶液的pH還會向上浮動0.2左右(you)。

  4.小鼠腦微血管內皮(pi)細胞(bao) 細胞(bao)傳代(dai)消化時所用胰酶濃度越高越好嗎?

  不見得(de)!因為胰蛋白(bai)酶溶液(ye)(ye)的消(xiao)化能(neng)力(li)是和溶液(ye)(ye)的pH、溫度、胰酶濃度及(ji)溶液(ye)(ye)中(zhong)是否含(han)有(you)Ca++, Mg++離子和血清等因素有(you)關。通(tong)常情況下(xia),pH 8.0 , 溫度 37 oC 其作用(yong)能(neng)力(li)強。另外(wai),鈣、鎂離子及(ji)血清均能(neng)大(da)(da)大(da)(da)降低其消(xiao)化能(neng)力(li)。我(wo)們每次進行傳代消(xiao)化前,一定(ding)要用(yong)D-Hanks液(ye)(ye)或PBS液(ye)(ye)反復沖(chong)洗(xi)細胞培養瓶,以便于將(jiang)含(han)血清的培養基沖(chong)洗(xi)干凈,這樣就能(neng)大(da)(da)大(da)(da)提高(gao)消(xiao)化液(ye)(ye)的消(xiao)化能(neng)力(li)。本中(zhong)心通(tong)常使用(yong)的消(xiao)化液(ye)(ye)濃度為:

  (1)0.05%胰蛋白酶+0.02%EDTA;

  (2)0.25%胰(yi)蛋白酶+0.03%EDTA。

  (3)0.25% 胰蛋(dan)白酶

  溶液(ye)(ye)pH8.0~9.0;使用D-Hank液(ye)(ye)配制。

  多數細胞傳代消化可使用0.05%胰蛋白酶+0.02%EDTA這種消化液。小鼠腦微血管內皮細胞

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