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小鼠骨髓瘤細胞

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小鼠骨髓瘤細胞

細胞的凍存方法
1.細胞:選對數生長期細胞,收集細胞24小時前換液一次。

2.計數:按常規方法把細胞制成細胞懸液,計數,令細胞密度達5×106/ml,離心去上清,吸入離心管中。

3.凍存液:先用培養液9分+DMSO 1分(或甘油)配成10%的DMSO凍存液,按上法一滴滴加入離心管中,然后用吸管輕輕吹打令細胞重懸。

4.分裝:分裝入無菌安剖中,每安剖加1.5毫升細胞懸液。

5.封口:用塑料安剖時擰緊瓶口即可;如用火焰封閉安剖口后,仔細檢查,定要封嚴,必要時可浸入藍色液中觀察,為安全起見,把安剖縫入紗布小袋中,以防液氮浸入后,融解時因受熱發生爆炸傷人;紗袋一端系以線繩,末端扎有小牌,注明:細胞名稱,凍存日期,以便日后查找。
小鼠骨髓瘤細胞

細胞復蘇的方法
1.從液氮罐中取出安剖;有時因安剖未封嚴,浸入了液氮,取出后因安剖內液氮迅速氣化而發生爆炸,因此應帶有防護眼睛和手套。
2.迅速放入盛有36℃~37℃水的搪瓷罐中,扣上蓋并不時搖動,盡快解凍。
3.剪開紗布口袋,取出安剖,用70%酒精擦拭消毒后,凈化臺上打開蓋,用吸管吸出細胞懸液,裝入離心管中,再補加10ml培養液,吹打使細胞懸浮。
4.低速離心(500~1000轉/分)5分鐘,取上清后再重復用培養液漂洗、離心。
5.加入培養液適當稀釋后,再移裝入培養瓶中,置溫箱培養,次日更換一次培養液后再繼續培養。

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