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大鼠胰島細胞瘤細胞

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應用領域醫療衛生,環保,化工,生物產業,農業

大鼠胰島細胞瘤細胞

一.培養基及培養凍存條件準備:

  1. 準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優質胎牛血清,10%,添加50 μmol/L β-巰基乙醇
  2. 培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度培養箱濕度為70%-80%。
  3. 凍存液90%*培養基,10%DMSO現用液氮儲存。
  • 細胞處理
  1. 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中加入8ml培養基,培養過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
  2. 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%可進行傳代培養

對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:

  1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子PBS潤洗細胞1-2
  2. 加2ml消化液0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)培養瓶中,置于37℃培養箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化
  3. 按6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。
  4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中

3)細胞凍存:細胞生長狀態良好時,進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,棄去培養基后加入少量胰酶,細胞變圓脫落后,加入約1ml血清的培養基后加入凍存管中,再添加10%DMSO進行凍存

大鼠胰島細胞瘤細胞注意事項: 
1. 收到細胞后,若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們聯系
2. 所有動物細胞均視為潛在的生物危害性必須在二級生物安全內操作,并請注意防護,所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
 

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