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大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞(高分化)

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1.大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞(高分化)PC-12(高分化)細胞液體培養基的保存是冷藏好?還是冷凍好?

  要冷藏!!因為液體培養基經冷凍后再經溶化時,其溶液的pH值會發生改變,溶液往往變堿,某些成分溶解也會受到影響對細胞生長不利。故液體培養基一定要存放在冷藏箱中,通常液體培養基在冷藏條件下可存放6個月 ~ 一年。

  2.PC-12(高分化)細胞 液體培養基中谷氨酰胺的作用,及使用方法。

  幾乎所有的細胞對谷氨酰胺有較高的要求,細胞需要谷氨酰胺合成蛋白質,在缺少谷氨酰胺時,細胞生長不良而死亡。所以,各種培養液中都含有較大量的谷氨酰胺。谷氨酰胺在溶液中很不穩定,應置-20 ?C冰凍保存,用前加入培養基中。加有谷氨酰胺的液體培養基4 ?C 冰箱儲存兩周以上時,應重新加入原來量的谷氨酰胺。基礎醫學細胞中心在其服務項目中配制分裝了高濃度(100倍)的谷氨酰胺溶液(1ml/支)。每支1ml的谷氨酰胺加到99ml*培養基中,其終濃度為2mM/ml培養基。包裝為粉紅色,-24?C保存。

  3. PC-12(高分化)細胞 培養用液pH對細胞生長的影響

  由于,大多數細胞適宜pH為7.2~7.4,偏離此范圍對細胞將產生有害的影響。各種細胞對pH的要求也不*相同,原代培養細胞一般對pH變動耐受差,無限細胞系耐受力強。

  但總體來說,細胞耐酸性比耐堿性強一些,偏酸環境中更利于細胞生長。因此,我們在配制培養用液時,可把液體的pH稍微調得偏酸一些。液體在經過0.10um或0.22um濾膜過濾時,溶液的pH還會向上浮動0.2左右。

  4.大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞(高分化)PC-12(高分化)細胞 細胞傳代消化時所用胰酶濃度越高越好嗎?

  不見得!因為胰蛋白酶溶液的消化能力是和溶液的pH、溫度、胰酶濃度及溶液中是否含有Ca++, Mg++離子和血清等因素有關。通常情況下,pH 8.0 , 溫度 37 oC 其作用能力zui強。另外,鈣、鎂離子及血清均能大大降低其消化能力。我們每次進行傳代消化前,一定要用D-Hanks液或PBS液反復沖洗細胞培養瓶,以便于將含血清的培養基沖洗干凈,這樣就能大大提高消化液的消化能力。本中心通常使用的消化液濃度為:

  (1)0.05%胰蛋白酶+0.02%EDTA;

  (2)0.25%胰蛋白酶+0.03%EDTA。

  (3)0.25% 胰蛋白酶

  溶液pH8.0~9.0;使用D-Hank液配制。

  多數細胞傳代消化可使用0.05%胰蛋白酶+0.02%EDTA這種消化液。
 

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