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細胞/ 組織總RNA 提取試劑盒

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詳細介紹
品牌其他品牌貨號RC101
規格50rxn供貨周期現貨
主要用途細胞/ 組織總RNA 提取應用領域醫療衛生,環保,食品,生物產業,農業

細胞/ 組織總RNA 提取試劑盒

FastPure® Cell/Tissue Total RNA Isolation Kit

細胞/ 組織總RNA 提取試劑盒

純度高: 獲得的RNA純度高,可直接用于下游純度要求高的實驗。

基因組殘留少: 配有基因組DNA吸附柱和DNase膜上消化模塊,可有效去除DNA污染。

簡單快速: 無需配備其他試劑、無需酚氯FANG抽提、常溫操作即可。

通用性強: 適用于多種不同類型的細胞、組織RNA的提取。

 

分別使用Vazyme #RC101和T公司同類試劑提取2 × 10個293T細胞總RNA,使用100 μl洗脫體積,取1 ul提取產物進行瓊脂糖凝膠電泳。從圖中可以看出,Vazyme #RC101提取RNA濃度高于T公司同類產品。

本試劑盒可從動物細胞或組織中快速提取總RNA。試劑盒基于硅膠柱純化技術,提取過程中無需使用有毒的酚/ 氯FANG抽提,全程僅需30 min。試劑盒中gDNA-Filter Columns能夠有效的分離上清和組織裂解物并吸附去除gDNA,另外,試劑盒中配有DNase膜上消化模塊,可有效去除DNA 污染;RNAPure Columns能高效的結合RNA,配以優化后的Buffer溶液,使得到的總RNA純度高,無蛋白和其他雜質污染,可用于RT-PCR、Real-time PCR、芯片分析等多種下游實驗。

組分

RC101-01 (50 rxn)

Buffer RL1

30ml

Buffer RL2

15ml

Buffer RW1

60ml

Buffer RW2

36ml

RNase-free ddH2O

10ml

Buffer RDD

6ml

DNase I, RNase-free

250 μl

gDNA-Filter Columns (each in a 2 ml Collection Tube)

50 

RNAPure Columns (each in a 2 ml Collection Tube)

50 

RNase-free Collection Tubes 1.5 ml

50

DNase I置于-20℃保存;

Buffer RL1在加入β-巰基乙醇后,可在4℃保存1個月;

其余組分均可在常溫(15-25℃)干燥條件下保存。

細胞/ 組織總RNA 提取試劑盒

 

Q1:RNA提取得率低。

A1:(1) 樣本保存不當或者樣本保存時間過久。樣本保存不當或者保存時間過長都有可能導致RNA的降解,采集新鮮樣本或經過液氮速凍后保存于-70℃或液氮中的樣本。

(2) 勻漿或者液氮研磨不充分。勻漿或者液氮研磨不充分,裂解不充分,導致RNA的釋放不充分。

(3) 組織或者細胞中RNA含量偏低:不同細胞和組織中 RNA 的豐度不同,需做預實驗確定合適的樣品起始量。

(4) 組織起始量太少或者太多:樣品量過少,則細胞組織中RNA含量較低;樣品量過多則可能超過裂解液的裂解能力,裂解將不*,從而導致RNA得率低或質量下降。

(5) 洗脫不充分。RNase-free ddH2O滴加到純化柱膜中央。純化柱的洗脫體積為50-200 μl,若洗脫效果不理想,可以加入在65℃預熱的RNase-free ddH2O后,延長室溫放置時間,離心后進行第二次洗脫。

Q2:gDNA-Filter Columns堵塞問題。

A2:(1) 樣品用量太多。本試劑盒適用于提取10-20 mg動物組織或者2-5×106個細胞,超量的組織會降低產量以及純度,操作時應減少樣本使用量。

(2) 樣品富含肌纖維。肌肉、心臟以及皮膚等富含肌纖維,肌纖維的分子量大,會引起柱子堵塞,樣本處理時采用液氮研磨方式會降低堵柱現象。

(3) 組織研磨或者勻漿不充分。研磨或者勻漿不充分時,碎片有可能導致柱堵塞,將裂解后的液體先進行 13,000×g 離心5 min,取上清再加入gDNA-Filter Columns。

Q3:RNA降解。

A3:純化后的RNA降解與樣本質量、是否被RNase污染、操作方式等因素有關:

(1) 樣本因為沒有及時保存,導致RNA降解。組織樣本或者細胞在收集后若不及時進行后續實驗,液氮速凍后于-80℃保存。

(2) 樣本反復凍融。組織樣本保存時,分小塊保存,避免因反復凍融導致樣本降解。

(3) 電泳原因。常見的RNA降解現象部分因為電泳過程引起的,電泳前將電泳槽用3%雙氧水浸泡20 min,之后用RNase-free ddH2O進行沖洗,電泳緩沖液用RNase-free ddH2O配置。

(4) 確保提取過程中使用的槍頭和離心管均為RNase-free。

Q4:提取的RNA有基因組DNA污染。

A4:不同種類組織細胞DNA、RNA含量相差很大,請勿超過20 mg組織和5×106細胞。如肝臟、脾臟和腎臟DNA含量豐富,請勿超過10 mg,否則會導致基因組殘留過多。gDNA-Filter Columns能夠有效去除體系中大部分DNA,如果下游實驗對微量DNA十分敏感,可根據具體情況選擇選擇使用以下方案:

(1) 使用試劑盒提供的DNase I進行膜上消化清除DNA污染。

(2) 設計引物時選用跨內含子的引物,從而避免基因組DNA模板參與擴增反應。

(3) 逆轉錄時選擇含有基因組去除模塊的逆轉錄試劑。

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