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一抗/二抗是如何進行操作使用的?看完下文就知道了

更新時間:2021-11-18瀏覽:919次

  一抗/二抗的操作步驟如下:
 
  用于檢測未知抗原的雙抗體夾心法:
 
  1、包被:用0.05MPH9.6碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質含量為1~10μg/ml。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml,4℃過夜。次日,棄去孔內溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘。
 
  2、5%脫脂乳(SMP)或者BSA37℃(或者RT封閉)封閉1小時。棄去孔內溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘。
 
  3、加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時。然后洗滌。(同時做空白孔,陰性對照孔及陽性對照孔)。
 
  4、加酶標抗體:于各反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標抗體(經滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃孵育0.5~1小時,洗滌。
 
  5、加底物液顯色:于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃10~30分鐘。
 
  6、終止反應:于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。
 
  7、結果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結果:反應孔內顏色越深,陽性程度越強,陰性反應為無色或極淺,依據所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號表示。也可測O·D值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調零后測各孔O·D值,若大于規定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性。

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