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這還是人們認識的qPCR熒光定量嗎?

更新時間:2018-12-07瀏覽:809次

   qPCR熒光定量是指在反應體系中加入熒光基因,利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程,后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。

  qPCR熒光定量技術不僅實現了PCR從定性到定量的飛躍,而且與常規PCR相比,qPCR熒光定量具有特異性更強、靈敏度高、重復性好、定量準確、速度快、全封閉反應、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點,已成為*的核酸分子定量的標準方法,目前在基因表達研究和臨床疾病檢測等領域已得到廣泛應用(如轉基因動植物檢測、RNAi基因失活率檢測、病原微生物或病毒含量檢測、基因差異表達、基因分型)。
  qPCR熒光定量的分類
  TaqMan熒光探針擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針,該探針為一寡核苷酸,兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時,報告基團發射的熒光信號被淬滅基團吸收;PCR擴增時,Taq酶的5‘-3‘外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監測系統可接收到熒光信號,即每擴增一條DNA鏈,就有一個熒光分子形成,實現了熒光信號的累積與PCR產物形成*同步。
  SYBRGreen熒光染料法是一種DNA結合染料,能非特異地摻入到雙鏈DNA中去。在游離狀態下,它不發出熒光,但一旦結合到雙鏈DNA中以后,便可以發出熒光。在qPCR熒光定量實驗中它的優點就是可以與任意引物、模板相配合,用于任意反應體系中。從經濟角度考慮,它也比其它的探針的qPCR熒光定量價格要便宜得多。但由于它能與所有的雙鏈DNA結合,所以一旦反應體系中出現非特異擴增,那它就會影響到定量結果的可靠性與重復性。要避免這種不利因素,可以通過選擇良好的引物并優化反應條件以消除非特異性影響。
  

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