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Thp-1細胞高效率轉染條件分享

更新時間:2020-08-24瀏覽:1307次


Thp-1細胞高效率轉染條件分享


一、轉染材料準備

1. 轉染試劑用量10ul

2. siRNA濃度:20um/L

3. 細胞密度:1*106-1*105

4. 轉染用培養板:6孔板

5. 轉染試劑:Advanced DNA RNA轉染試劑;貨號:AD600025

6. 轉染時間:48小時

7. 細胞培養胎牛血清:Z7180FBS-500超低內毒素胎牛血清

8. 細胞凍存液:L0100無血清細胞凍存液


注意:本細胞轉染用量條件不適合lipo使用。


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操作過程:


   1.提前1接種細胞細胞匯合度在60-80%左右,再進行轉染。

2核酸復合物制備:將核酸與轉染試劑按照比例關系直接混合,用移液器吹打、混勻,室溫靜止15分鐘。

3.在細胞培養基加入核酸復合物根據參考用量在細胞中加入核酸復合物,并輕輕混勻;細胞培養基里面可以含有血清。

4.細胞換液:轉染24小時后對細胞進行正常換液,懸浮細胞轉染過程中不用換液。

5.分析結果質粒DNA轉染48-72小時后熒光檢測轉染效率,48-96小時檢測mRNA或蛋白表達。若進行穩定表達細胞株的篩選,則在轉染后24-48小時左右加入適量的藥物進行篩選。siRNA轉染后9小時熒光檢測轉染效率,48-72小時檢測mRNA或蛋白表達。


二、轉染試劑產品介紹

Zeta Life 公司與美國加利福尼亞大學舊金山校區聯合開發用于哺乳動物細胞、活體動物轉染的 Advanced DNA RNA 第三代多肽小分子轉染試劑,此技術成為新的全球蛋白功能、免疫細胞及干細胞治療、研發及生產的主要關鍵技術之一。


三、優秀表現

Zeta Life多肽小分子轉染試劑尺寸大小是傳統脂質體轉染試劑體積的1/10;

本轉染試劑是通過細胞內?和細胞主動吸收進入細胞;

本轉染試劑進入后對細胞膜無物理性損傷,不易出現細胞變形,保持高的細胞活力;

不激活細胞表面或細胞體內marker;

可反映真實的細胞通路蛋白原始數據;

可轉染免疫細胞、懸浮細胞等;



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