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IP、co-IP、pull-down?

更新時間:2019-12-09瀏覽:1301次

某個實驗間隙…

萌新:開題報告已提交,轉眼1個月過去了,實驗還是一頭霧水,為啥我的co-IP拉不下來蛋白?

奮斗中的師兄:我當初正好相反,拉下來的蛋白被抗體條帶覆蓋住了,換個抗體忒不好找,無奈換了個蛋白,還好挺順利。

久經沙場的大師兄:蛋白吧,不但種類多,理化性質差異較大,關鍵它們又喜歡組隊在細胞里干活,co-IP又是常用的手段,掌握好這個工具還是很重要的,總不能隨隨便便就換個蛋白。

 IP、co-IP、pull-down簡介

IP(Immunoprecipitation),免疫沉淀:是利用固定在磁珠或瓊脂糖樹脂等基質上的特異性抗體對抗原進行小型親和純化的一種方法。

 

 Co-IP(co-Immunoprecipitation),免疫共沉淀: co-IP是一種常用的鑒定蛋白-蛋白相互作用的方法,其基本實驗流程和IP類似,通過使用誘餌蛋白(IP中的抗原,bait protein)特異性抗體間接捕獲與其結合的靶蛋白(prey protein)。

 

Pull-down:另外一種進行蛋白-蛋白相互作用研究的方法,針對無法找到可用的抗體的靶蛋白。可以采用一個表位標記標記蛋白質(可在細胞內組成型表達),將其固定在基質上獲得互作蛋白。很多蛋白質由于無法找到可用的抗體而無法進行免疫沉淀。

 

 

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