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動物實驗做得好,只因做了這些...

更新時間:2019-03-25瀏覽:1729次

要想發表高分 SCI 文章,往往需要和動物實驗打交道。為了獲得理想中的動物實驗結果,對

科研汪而言,具有扎實的相關基礎知識就是*的。現在小魚就從實驗動物的飼養條件、

給藥劑量及方式和分組及編號三個方面對動物實驗的基礎知識進行盤點。

實驗動物的飼養環境

做動物實驗,zui先要做的事情就是要養好動物。因而,好的動物飼養環境,對于動物實驗的

成功也是zui基本的保證然而萬事開頭難,這也是個看似平常,但卻有著不少細節的問題。

1般情況下,小鼠是大多數實驗室采用的實驗動物模型。由于小鼠對環境適應性的自體調節

能力和疾病抗御能力較其他實驗動物差,且小鼠的品種和品系繁多,各個品種和品系都有自

己的特殊要求,即不同等級的小鼠應生活在相應的設施中,因此必須根據實際情況給予1個

清潔舒適的生活環境。

現階段很多高校1般都會有專門的動物房及專業的飼養員進行培養,所以可能更多時候,小

伙伴們所糾結的是對于實驗動物,每籠該飼養多少才算合適呢?畢竟,每種動物都有1個合

適生存的zui小平均空間,低于這個空間則會出現1些相互打架、易致病等1系列不良現象。

在此小魚建議大家,針對小鼠籠/大鼠籠,每籠飼養 5 左右為宜,zui多不超過 7 只。豚鼠通

常被置于兔籠或大鼠籠中,1般以 3-4 只為宜。兔、貓、狗等,1般都是每籠只養1只,且

有專門的籠具。

在實驗小鼠中,轉基因老鼠可以說是特別嬌貴的存在,其飼養的條件及要求均要高于普通小

鼠。SPF 級環境是飼養轉基因小鼠的*環境,其中,高壓滅菌過的墊料和 M5 型的小鼠飼

養籠是其標準配備,不僅飼料要采用 60Coγ 射線滅菌的無菌全價營養顆粒料,且飲用水也是高壓滅菌后的純凈水(每周換水 2-3 次)。飼養室內每天也需經紫外燈照射兩小時殺菌。

另外,需要密切觀察轉基因小鼠的飲食、活動及全身情況。如果小鼠食欲旺盛;眼睛有神,

反應敏捷;體毛光滑、活動有力;糞便黑色呈麥粒狀,則說明轉基因小鼠處于健康狀態,可

用于后續其他的生物實驗。

給藥劑量的換算

動物實驗中,zui常涉及的就是給藥劑量的估算,想來大多數同學都是通過查文獻、參考別人

使用的藥物劑量來設計自己的實驗,但是如果是1種新型研發藥物時,又該如何確定實驗動

物的給藥劑量呢?

此時可參考徐叔云教授主編的《藥理實驗方法學》中1個關于人和動物間按體表面積折算的

等效劑量比值的表格來計算使用藥品的劑量。(該表格幾乎被藥理專業的人們奉為經典,1

直在科研中沿用)

1190上述表格中的zui1行,便是劑量換算中的折算系數(已經把體重與體表面積的關系折算過

了),依據公式可將人的臨床劑量轉換為實驗動物的劑量。

舉個栗子,如人的臨床劑量為 X mg/kg,換算成大鼠的劑量 Y= X mg/kg × 70kg ×

0.0018/0.2kg=6.3 X mg/kg。即按單位體重的劑量來算,大鼠的等效劑量相當于人的 6.3 倍。

依次類推,可以算出小鼠、豚鼠等其他動物劑量與人的比值。

Tips1)人的臨床劑量通常會以 mg/d 來表示,此時,需要將其轉化成 mg/kg 來代入公式中。

2)這種換算關系的前提是各種動物對某種藥物的敏感程度是1樣的。因而,在實際的動物

實驗中,藥物劑量的確定1半可參考等效劑量,1半需要設置藥物濃度梯度來摸索*給藥

劑量。3)以上表格中,人的體重設為 70kg,但是實際上人的體重更接近于 60kg 左右。如此

修正后表格如下圖所示。

1191同樣,給藥途徑也對藥物的作用產生1定的影響給藥途徑1般常見的有腹腔注射,皮下注

射等方式。

前者在給小鼠注射時,將針頭約以 10°角從下腹部刺入皮下,然后再以 45°角刺入腹腔,注入

藥液,穿刺部位不宜太高,否則藥液會注入到胸腔;后者在給小鼠注射時,則將注射器針頭

10°角刺入前肢腋部或頸背部皮下。注射后,皮下可見1隆起小包,然后將針頭稍向后退

出1段再順時針轉動針尖撥出,以防漏藥。

不同給藥途徑劑量的換算如下圖所示。

1192實驗動物的分組及編號

實驗小鼠常需要標記以示區別,編號的方法很多,應根據小鼠的品系、數量和觀察時間長短

等因素來選擇合適的標記方法。

其中,化學藥品涂染小鼠被毛法是實驗zui容易掌握且zui常用的方法。常用的涂染化學藥品有

三種:1)涂染紅色:0.5%中性紅或堿性品紅溶液。2)涂染黃色:3-5%苦wei酸溶液。3)涂

染黑色:煤焦油的酒精溶液。實驗中應根據小鼠的品系選擇染料的顏色。

1般用1種化學藥品涂染實驗動物背部被毛即可,如果實驗動物數量較多,可選擇兩種染料。

但是該法對實驗周期短的實驗動物合適,因為時間長了染料的顏色易退掉。這對辛辛苦苦做

實驗,期待有個好結果的童鞋而言,可是個災難性的打擊。

下面小魚簡單介紹下用染料給小鼠編號的原則:先左后右,從前到后#1:涂染到左前肢;

#2:左側腹部;#3:左后肢;#4:頭頂部;#5:腰部;#6:尾部;#7:右前肢;#8:左腹部;

#9:右后肢。且聯合使用不同顏色可將編號編至 99 號。

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也許有的小伙伴們仍會擔心即便用新染料給小鼠編號,短期內染料掉色的可能也不是沒有的,

有木有1勞永逸的標記小鼠的方法么?在此,小魚再給大家推薦兩個可讓小鼠終身標號方法。

1)打耳孔法或剪缺口法。

前者即利用打孔機在鼠耳1定位置打1小孔來表示1定的號碼,后者用剪子在耳緣剪缺口,

剪完后還應用滑石粉捻1下,以免愈合后看不出來。總的來說,1般習慣在耳緣內側打小孔,

按前、中、后分別代表 123 號,在耳緣部打成1個缺口,分別表示 456 號,打成雙

缺口則表示 789 號。右耳表示各位,左耳表示十位,再加右耳中部打孔表示百位。該法

可以編至 1400 號。2)剪趾法,即將小鼠左右前肢的腳趾按不同排列代表不同的數字,1般習慣從左向右第1

趾為#1,第二趾為#2,前1、二趾同時剪去為#3,第三趾為#4,前三趾同時剪去為#5,第1、

三趾同時剪去為#6,第四趾剪去為#7,第1、四趾同時剪去為#8,第二、四趾同時剪去為#9

右前肢表示個位,左前肢表示十位,按此法四肢可標號至 4999 號。

 

 

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