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美麗的 ELISA,你的考驗我懂

更新時間:2019-03-24瀏覽:835次

作者:毛博

酶聯免疫吸附實驗,簡稱為 ELISA。正好是一個美麗的女孩的名字。日本有位女藝人野田繪

理紗,英文名字就叫 Elisa

694ELISA 實驗是一種非常經典的免疫學實驗。雖然歷史非常悠久了,但是還是不斷地在臨床和

基礎研究中得到應用。其主要用于:免疫酶染色各種細胞內成份的定位;研究抗酶抗體的合

成;顯現微量的免疫沉淀反應;定量檢測體液中抗原或者抗體成份。毛博做過一段時間的

ELISA,總結了一些經驗教訓。毛博還是采用一貫的套路:問題,可能的原因,解決方法。供

大家參考。

問題 1陽性與陰性不能達到 2.1 的比值,陰性顏色太深。

可能的原因:

陰性對照(也就是陽性對照的除目標抗原外的其它成分)中有某種成分與一抗作用。

解決的方法:純化抗原除去干擾成分。

695問題 2陽性與陰性不能達到 2.1 的比值,陽性顏色太淺。

可能的原因3 個:

1)一抗效價不好。

2)抗原太稀。

3)封閉時間過長。

解決的方法:

1)換用一抗或增加一抗用量。

2)增加抗原濃度。

3)縮短封閉時間,封閉時間一般 37 攝氏度 3 個小時,或者 4 攝氏度過夜。不能比這個更長

了。

問題 3增加抗原濃度,一抗濃度不變,顯色反應沒有表現出應有的梯度。

可能的問題: 一抗與抗原的比例已經飽和。

解決的方法: 增加一抗用量; 或在一抗用量不變的情況下減少抗原濃度做梯度。

問題 4增加一抗濃度,顯色反應沒有表現出應有的梯度。

可能的原因:一抗與抗原的比例已經飽和。

解決的方法:增加抗原用量;或在抗原用量不變的情況下減少一抗濃度做梯度。

696問題 5加完 TMB 顯色后顏色梯度很明顯,但加了硫酸終止反應后顏色梯度沒有那么明

顯了。

可能的原因:硫酸可能把其它成分都炭化了。

解決的辦法:加少一點硫酸,參考值:50 μlTMB+35 μl 硫酸;或者采用 1M HCL 作為終止

液,50ulTMB+50ul1M HCL

毛博認為:這些步驟里面,一抗和封閉是兩個關鍵。如果 ELISA 做不出滿意的結果,首先應

該從這兩個方面改進。Elisa 實驗看似簡單,其實不然。別小瞧了這個美麗的女孩子喲。光是

一個加樣就有很多講究。

ELISA 中加樣須注意如下問題:

吸取樣品時,加樣槍吸頭不應黏附多余的液體;加樣時不可 90 度向孔中滴加液體,這樣會

導致液體殘留在吸頭上,加樣不準確!

不要將吸頭伸入孔中,一方面若接觸孔底可能壓彎吸頭,另一方面可能會將孔中的液體吹起

來,加樣不準確!

正確的加樣方法應為 45 度,吸頭貼著孔壁加入,應注意:

角度太小,會使液體殘留在孔壁上,導致加樣不準確!

吸頭應當貼著管壁和液面的交界處!

697綜上所述,Elisa 實驗看似簡單,其實還是有很多細節需要我們注意的。以上毛博介紹了 Elisa

實驗的一些經驗教訓,希望對大家有所幫助。

 

 

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