熟妇高潮喷沈阳45熟妇高潮喷_人妻丰满熟妇av无码区乱_黑人人妻AV一区二区三_少妇太爽丰满一区二区

當前位置:首頁 > 技術文章 > SDS-PAGE 蛋白質樣品的制備

SDS-PAGE 蛋白質樣品的制備

更新時間:2019-03-19瀏覽:1273次

將收集的各樣品加入等體積的 2×SDS-PAGE Loading Buffer,煮沸裂解 5min,冰浴

2min,12,000rpm 離心 10min,取上清-20℃保存備用。

SDS-PAGE 蛋白質電泳(參照分子克隆實驗指南操作)(薩姆布魯克,2002)

1)按照電泳裝置的使用說明,裝好潔凈干燥的玻璃板。

2)分離膠的制備

按下列成分配制10mL 12%分離膠:

ddH2O

30%丙烯酰胺混合液

1.5M Tris(pH8.8)

10%SDS

10%過硫酸銨

TEMED

3.3 mL

4.0 mL

2.5 mL

0.1 mL

0.1 mL

0.004 mL

總體積

10 mL

各成分加入后迅速旋渦混勻,用微量移液器將其小心地注入準備好的玻璃板間隙中,

并為積層膠留出足夠空間。輕輕在頂層加入一薄層水封頂,以防止空氣中的氧對凝膠聚合的

抑制作用。凝膠聚合完成后,倒掉覆蓋的水層,用水清洗凝膠頂部數次,用濾紙吸干凝膠頂

端的水。

3)積層膠的制備

按下列成分配制2mL 5%的積層膠:

ddH2O

30%丙烯酰胺混合液

1.4mL

0.33mL1.0M Tris(pH6.8)

10%SDS

10%過硫酸銨

TEMED

0.25mL

0.02mL

0.02mL

0.002mL

總體積

2mL

各成分加入后迅速旋渦混勻,用微量移液器將其灌注到分離膠上,灌滿后小心插入加樣

梳,盡可能避免產生氣泡。

4)待積層膠凝固后,小心拔下梳子。

5)將凝膠固定于電泳裝置上,加入足量的1×Tris-甘氨酸電泳緩沖液,在加樣孔中分

別加入20μL各樣品。

6)樣品在積層膠中電泳時,使用80V電壓,待溴酚藍帶進入分離膠后,將電壓升至

120V,繼續電泳直至溴酚藍帶到達分離膠的底部且開始泳出膠底面,關閉電源。

7)卸下凝膠,將其浸泡在至少5倍體積的考馬斯亮藍R-250染色液中,置水平搖床上

室溫染色至少4h,之后取出染色的凝膠并回收染液,以備再用,將凝膠浸泡于考馬斯亮藍

脫色液中,在水平搖床上脫色4~8h,其間更換脫色液3~4次,直至凝膠脫色到條帶清晰為

止,觀察記錄結果并拍照。

Contact Us
  • 聯系QQ:277124344
  • 聯系郵箱:277124344@qq.com
  • 聯系電話:19540095576
  • 聯系地址:廣州市白云區鶴正街1號中海聯8立方創意園A1棟304室

掃一掃  微信咨詢

© 2024 廣州市超博科技有限公司 版權所有  備案號:

技術支持:        GoogleSitemap

服務熱線
13760660301

微信服務號