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RNA的瓊脂糖凝膠電泳實驗原理和步驟

更新時間:2019-03-05瀏覽:3502次

RNA的瓊脂糖凝膠電泳實驗原理和步驟 

一、實驗目的 

掌握植物總RNA非變性膠電泳的原理和方法。 

二、實驗原理 

RNA電泳可以在變性及非變性兩種條件下進行。非變性電泳使用1.0%--1.4%的凝膠,不

同的RNA條帶也能分開,但無法判斷其分子量。只有在*變性的條件下,RNA的泳動

率才與分子量的對數呈線性關系。因此要測定RNA分子量時,一定要用變性凝膠。在需快

速檢測所提總RNA樣品完整性時,配制普通的1%瓊脂糖凝膠即可。 

 

三、實驗材料、器具及藥品 

蘑菇的總RNA溶液。 電泳儀,電泳槽,電子天平,移液器,槍頭,微波爐,紫外透射檢

測儀等。 瓊脂糖,1XTAE電泳緩沖液,0.5μg/ml溴化乙錠(EB)10X載樣緩沖液。 

四、實驗步驟 

(1)用1×TAE電泳緩沖液制作瓊脂糖凝膠,加1×TAE電泳緩沖液至液面覆蓋凝膠。 

(2)在超凈工作臺上,用移液器吸取總RNA樣品4μl于封口膜上。在實驗臺上再加入5μl 

1×TAE電泳緩沖液及1μl 的10X載樣緩沖液,混勻后,小心加入點樣孔。 

(3)打開電源開關,調節電壓至100V,使RNA由負極向正極電泳,約30min后將凝膠

放入EB染液中染色5min,用清水稍微漂洗。在紫外透射檢測儀上觀察RNA電泳結果。 

 

 

RNA的變性瓊脂糖凝膠檢測 

試劑: 

(1)MOPS緩沖液(10*):0.4mol/L 嗎啉代丙烷磺酸(MOPS) (Ph7.0),0.1mol/L NaAc, 

10mol/L EDTA。 

(2)上樣染料:50%甘油,1mmol/L EDTA ,0.4%溴酚藍,0.4%二甲苯藍。 

(3)甲醛。 

(4)去離子甲酰胺。v電泳槽清洗:去污劑洗干凈(一般浸泡過夜)——水沖洗——乙醇

干燥——3%H2O2灌滿——室溫放置10分鐘——0.1%DEPC水沖洗。 

操作: 

(1) 將制膠用具用70%乙醇沖冼一遍,晾干備用。 

(2) 配制瓊脂糖凝膠。 

①稱取0.5g瓊脂糖,置干凈的100ml 錐形瓶中,加入40ml蒸餾水,微波爐內加熱使瓊

脂糖*溶化均勻。 

②待膠涼至60--70 ℃,依次向其中加入9ml 甲醛、5ml 10X MOPS緩沖液和0.5ul 溴化

乙錠,混合均勻。 

③灌制瓊脂糖凝膠。 

(3) 樣品準備: 

① 取 DEPC處理過的500ul小離心管,依次加入如下試劑: 10x MOPS緩沖液2ul,甲

醛3.5ul,甲酰胺(去離子)10ul,RNA 樣品 4.5ul,混勻。 

② 將離心管置于60℃水浴中保10分鐘,再置冰上2分鐘。 

③ 向管中加入3ul 上樣染料,混勻。 

(4)上樣。 

(5)電泳:電泳槽內加入1XMOPS緩沖液,于7.5V/ml 的電壓下電泳。 

(6)電泳結束后,在紫外燈下檢查結果。 

 

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