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細胞凍存液的操作步驟和注意事項

更新時間:2018-12-04瀏覽:2548次

   細胞凍存和復蘇操作步驟:

  細胞凍存和復蘇采取“慢凍快融”的原則,慢速冷凍可使細胞內的水份滲出細胞外,減少細胞內形成冰晶的機會,快融以保證細胞外結晶快速融化,避免慢速融化水份滲入細胞內,再次形成胞內冰晶造成對細胞的損傷。
  (一)細胞凍存
  1.配制含的細胞凍存液,預冷(新鮮配制的凍存液會產生大量的熱);
  2.取對數生長期的細胞,用細胞消化酶將單層生長的細胞消化下來;懸浮細胞則直接將細胞收集到離心管中;
  3.離心;
  4.去除上清液,逐漸加入適量預冷的細胞凍存液,用吸管輕輕吹打使細胞均勻,計數,調節凍存液中的細胞終濃度;
  5.將細胞分裝入凍存管中,每管;
  6.在凍存管上標明細胞的名稱、凍存時間及操作人員姓名;
  7.凍存:標準的凍存程序為降溫速率,則可迅速放入液氮中。
  (二)細胞復蘇
  1.佩戴眼鏡和手套,從液氮中取出凍存的細胞管。
  2.迅速放入水浴中,并不時搖動,在1分鐘內使其*融化,然后在無菌條件下取出細胞。
  3.棄去上清,加入適量培養液混勻后接種于培養瓶中,次日更換一次培養液。
  細胞凍存液的注意事項:
  1.從增殖期到形成致密的單層細胞以前的培養細胞都可以用于凍存,但為對數生長期細胞。在凍存前一天換一次培養液;
  2.將凍存管放入液氮容器或從中取出時,要做好防護工作,以免凍傷;
  3.凍存和復蘇好用新配制的培養液。

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