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讓細胞培養不再為難新手

更新時間:2018-10-16瀏覽:1361次

                                                                  讓細胞培養不再為難新手

                                                                       作者:畢老師 


細胞培養起初對于我這種“女漢子”性格的人來說,著實是枯燥的工作,因為面對的細胞, 它不會說話不會笑不能對你有任何回應,而且對于喜歡外科喜歡拿刀的我來說,細胞培養更 像是個內科醫生做的事情,每天換液就如同換藥,它污染了就需要上各種抗生素來“搶救” 它。。。。。。可是隨著一天天的相處,一天天的用心體會,我漸漸發現原來細胞培養也是一項
十分有意思的工作,下面將我的一些經驗分享給大家。 
 
換液: 
 
從培養箱中取出培養瓶; 
 
用吸液管將瓶的廢液全部吸出(在培養瓶的左下角吸走液體,勿接觸細胞),吸管丟棄。 
 
更新吸液管,從培養液貯存管中吸取新培養液,加入培養瓶,注意哦,千萬不要直接沖洗細
胞,細胞們都嬌滴滴的,容不得半點“風吹雨打”。吸出廢液至加入新液之間一般不超過 5-10 秒鐘,以免細胞因干燥而死亡。 
 
保留該吸管(節省一根是一根),用于吸取下一輪需要換液的同源細胞的廢液,注意一定是
廢液。 (同源細胞、無污染的幾個培養瓶可用同一根吸管吸走或加入培養液。) 
 
  先換生長速度慢的細胞,再換生長速度快的(這似乎和我們平時“早起的鳥有蟲吃”的原 則不同,長得快的要后吃飯,嘿嘿);先換無污染的,再換有污染的。 

微生物污染處理: 
 
  每天到實驗室,肯定是看我的“心肝寶貝兒”——細胞,害怕的事情莫過于 發現細胞污染了,那種心情就像母親每天醒來看自己的孩子,結果發現孩子生病了一樣焦急
難過。如何發現細胞污染呢?首先要在取出細胞后,先觀察一下培養液的顏色,如果培養液 都能看出污染了,那這個細胞基本就無藥可救了。 
 
  培養液肉眼看著正常,細胞就一定正常嗎?答案是否定的。關鍵的還是要通過我們的
*神器——顯微鏡來觀察,下面給大家看一些細胞污染的圖片: 

  有微生物污染的一般均丟棄。如污染不嚴重而該細胞株較重要,則可試行治療如下:盡
量吸凈原培養液裝在有蓋的小瓶子里,蓋好;用過吸管放桌下收集有污染物品的盒子里;用
Hanks 液或培養液洗滌 2 次(環形搖晃幾周,再將液體吸走,放在有蓋的瓶子里);加入抗生
素。如為霉菌污染,則加抗霉菌素—兩性霉素 B(Fugzone)終末濃度為 2.5 ug/ml。預防量減
半。 

  細胞污染不于細菌等微生物,當同時培養多種細胞,細胞與細胞間也會發生交叉污
染,這個時候我們可以用遺傳霉素(Geneticin)終末濃度 100 ug/ml,如保存液為 1:30,則
在培養瓶/皿中每 3 ml 培養液加 0.1 ml Geneticin。 
 
單純傳代步驟: 
 
以 25 cm2 培養瓶(6 ml)為例,用 5 ml 吸管將原培養液吸出; 
 
用 2 ml 吸管吸取 D-Hanks 液 2 ml(12.5 cm2 培養瓶和 6 皿板用 1 ml)加入培養瓶,以洗清
血清,輕晃幾次后吸出; 
 
用 2 ml 吸管吸加 TE 1/2(Trypsin 0.025% + EDTA 0.01%)2 ml,輕晃使之到達每個角落(一定
要照顧到各個角落啊,即使是冷宮的細胞娘娘也要照顧到),放入 37 °C 水浴,使貼皿細胞脫
落。 
觀察時見細胞基本浮起,用 2 ml 吸管加 0.2 ml 血清中和,吸出瓶中的液體及細胞(即 2.2 
ml)。如按照 1:4 稀釋傳代,則 0.5 ml 傳代(1.5 ml 保存或丟棄)加至 15 ml 離心管。該吸管
可保留再用。 

取等量的離心管作配對,進行離心(5 分鐘,標記 60 處,即 1000-1500 轉/分); 
 
離心后用上一步驟保留的吸管將離心管中的上清液吸走;換一根 5 ml 吸管,吸取 6.5 ml 培
養液,加 5.5 ml 至培養瓶(12.5 cm2 培養瓶則吸取 4.0 ml 培養液,加 3 ml 至培養瓶),加 1 
ml 至離心管,用巴氏管適度吹打 5 次,全部吸出,水平橫持巴氏管滴入培養瓶,保留 1-2 滴
加入血球計數板作計數。 
 
將培養瓶置于培養箱。 
 
  以上都是常規的操作,也是每個科研狗每天都要面對的工作,貌似枯燥無味,實則妙趣
橫生,只要用心你會發現其實別有洞天。 
 

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