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干貨 | 培養液選配 7 個關鍵點,太實用了!

更新時間:2018-10-16瀏覽:1125次

                                        干貨 | 培養液選配 7 個關鍵點,太實用了! 
                                                               作者:毛博 
培養液是人工模擬細胞體內生長的生存環境,對于細胞培養起著關鍵性作用。在這方面,毛
博(文章作者)走了彎路之后得到一些寶貴的經驗和教訓,都是來自實戰一線的干貨,字字血聲聲淚, 先貢獻給大家。 
  

 
                                                  培養基,原配的總是合適的 
 
選擇培養基沒有一定的標準,某種培養基可以適合多種細胞,某種細胞也可以在不同培養液
中生長。但是,建立某種細胞株所用的培養基應該是培養這種細胞first choice培養基。可以查閱
參考文獻,或在購買細胞株時咨詢。例如,小鼠細胞株多選 1640;進行細胞雜交,基因轉移 實驗,可選擇 IMDM。 另外,本實驗室用慣了的培養基不妨一試。這些都是師兄師姐們用 了幾十年了。肯定好用的。  
  
                                            1640 還是 DMEM,取決于你發文章的決心 

 

1640 的確是非常便宜的培養基,也很好用。所以在國內的實驗室中,用的非常非常多。但 是,它的緩沖力弱,所以有時會對細胞的生長狀態有影響,尤其是一些實驗室長期傳代狀 態不好的細胞。所以,毛博很敗家地推薦:為了早點出文章,有條件還是用 DMEM,當然不 是昂貴的 GIBCO 公司的,實在是太貴了。HYCLONE 的砍砍價,干粉很便宜,但是明顯雜質和 質量不如 GIBCO。一分價錢一分貨。真的是真理哈。 
  
                                                         2 到 3 周的量,多了也是浪費 
 
一旦在新鮮培養基中添加了血清和抗生素時,應該在 2 到 3 周內用完它。因為,一些抗生素 和血清中的基本成分在解凍后就開始降解。2-3 周后就降解完了。所以,一次少配一點,就 不要偷懶了。 
  
                                                                    慎用碳酸氫鈉 
 
培養基的 pH 值隨著碳酸氫鈉量的增加,呈拋物線增長,當碳酸氫鈉加到一定量時,pH 變化 越來越小。而培養基的滲透壓值隨著碳酸氫鈉量的增加,呈直線增長,碳酸氫鈉量越大,滲
培養基變成了高滲溶液,細胞會脫水萎縮滴。 
  
                                                                     血清分裝防膨脹 

必須貯存于–20 ~ -70℃,若存放于 4℃,如同第三條所說的,2~3 周就降解了。教大家一 個小竅門:可將 1 瓶 500ml 的血清,每次 40~45 ml 分裝于無菌 50 ml 離心管中,由于血清 結凍時體積會增加約 10 %, 必須預留此膨脹體積 5~10ml,否則會把離心管凍裂滴。  
  
                                                                  血清解凍,慢是* 

血清的解凍和細胞的解凍正相反:細胞是越快越好;血清是越慢越好。血清解凍步驟: -20℃ 或–70℃冰箱拿出來,放到 4℃冰箱,放一天。在這一天中,時不時地去搖晃一下,使溫度與 成分均一,減少沉淀的發生。一天過后,拿出來放到室溫下,等血清恢復室溫了,再分裝。  
 
                                                                  熱滅活?別上它的當! 
 
掌握一條原則:除非必須,一般不要熱滅活,因為會造成沉淀物顯著增多,且會影響血清的 品質。這些沉淀物在顯微鏡下觀察,像是“小黑點”,常常誤以為是血清遭受污染,又去過濾 呀什么的,無端增加沒有必要的工作量。這里毛博提醒大家:一般不要熱滅活。 

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