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細胞凍存與復蘇的前世今生

更新時間:2018-10-08瀏覽:1682次

細胞凍存步驟: 

細胞復蘇步驟: 

常見注意事項: (廣州市超博科技有限公司)

有關 DMSO 的一些注意事項:?? 

DMSO 能夠快速穿透細胞膜進入細胞中,降低冰點、延緩凍存過程,同時提高細胞內的離子 濃度、減少細胞內冰晶的形成,從而減少細胞損傷程度。 

DMSO 在溶解過程中會放熱,應先與培養基混勻后再加血清,同時凍存液需要提前配置, DMSO 現配對細胞的毒性可能更大; 

復蘇時,要離心去除 DMSO,并用新鮮的培養基洗滌 1-2 次,注意離心的時候速度不要太快; 

 

2.  血清需要比正常養細胞時多加,一般為 10%-20%。 

3.  解凍時,要盡快將凍存管整體溫度上升至 37 攝氏度,由于凍存管具有一定的厚度,故 而可以將水浴鍋的溫度調至 40 攝氏度左右,可以縮短解凍時間。 

4.  梯度凍存,即可以按照-4℃-->20℃~40℃-->80℃-->液氮的順序程序性降溫。 

 

知識點思維擴散: 

  1972 年,冷凍損傷的兩因素假說:冰晶損傷和溶液損傷假說被 Mazur 等人首先提出,

他們是根據中國倉鼠組織培養細胞的低溫保存實驗數據分析得到的。 

 冰晶損傷假說認為隨著溫度的下降,細胞內外的水分結冰,所形成的冰晶會造成細胞膜

和細胞器的破壞并引起細胞死亡。這種因細胞內部結冰而致的細胞損傷即就是冰晶損傷

(Intracellular ice damage)。冰晶損傷是由冷卻速度過快造成,冷卻速度越快,冰晶損傷越大。 

 溶液損傷解說認為隨著溫度的下降,細胞外部的水分會先結冰,從而使得未結冰的溶液

中電解質濃度升高,細胞膜上的脂質會因長時問暴露在高溶質的溶液中而受到損壞,細胞發

生滲漏,導致在復溫時大量水分滲入細胞內造成細胞死亡。這種因保存溶液溶質濃度增高而

致的細胞損傷被稱為溶液損傷(Solution damage)。溶液損傷是由冷卻速度過慢,使細胞在高

濃度的溶液中暴露的時間過長而造成,冷卻速度越慢,此損傷越嚴重。 

  作者:老談 

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